Yakko, Wakko et Dot sont les frères et sœur Warner, créés au début de l'âge d'or de l'animation américaine. Ces héros de cartoons loufoques s'avèrent rapidement incontrôlables, et sèment la panique dans les studios Warner Bros. Enfermés dans le château d'eau du studio, ils s'en échappent occasionnellement pour vivre bon nombre d'aventures historiques, face à une adversité impuissante devant leurs bêtises. De nombreux autres protagonistes font partie de l'univers des Animaniacs : Minus et Cortex, Rififi l'écureuil et son neveu Noisette, les Affranchis, Toubeau et Mindy, Rita et Spot, le Dr Gratésnif, l'infirmière Nounou, Poulbot, ou encore Freakazoid...